二门氏阪崎奶粉能力中沙菌和菌的结果验证肠杆测定分析

3.2奶粉样品中沙门氏菌的奶粉能力检测分析

3.2.1样品中沙门氏菌的平板分离

样品经２次增菌后，划线接种于BS琼脂平板、中沙XLD琼脂平板和沙门氏菌显色平板上进行分离培养，门氏结果见表2：W样品在BS、菌和菌的结果XLD以及沙门氏菌显色3种平板上均出现可疑沙门氏菌菌落，阪崎其中在BS和XLD平板上可见典型沙门氏菌落③和④，肠杆测定而在沙门氏菌显色平板上均为可疑菌落取①和②2个菌落鉴定。验证Q样品在BS平板无可疑菌落，分析而在XLD和沙门氏菌显色平板上无典型菌落，奶粉能力可能是中沙非典型菌落或干扰菌。

沙门氏菌属能产生特异性较强的门氏辛酯酶，具有辛酯酶活性的菌和菌的结果干扰菌有铜绿假单胞菌、粘质沙雷氏菌和蜂窝哈夫尼亚菌，阪崎这些菌在沙门氏菌显色培养基上会生成紫红色干扰菌。肠杆测定肠炎沙门菌双相亚利桑那亚种在沙门氏菌显色培养基上呈现因培养基厂家不同而不同墨绿到蓝色菌落，验证这容易与其它肠杆菌混淆。杨云斌比较了沙门氏菌和干扰菌在3种分离平板上的特点，见表3。从表２和表３可以发现，在BS平板上，典型沙门氏菌落和沙门氏菌主要干扰菌的菌落特点容易区分开来，而在其他2种平板上则容易混淆。

3.2.2奶粉样品中沙门氏菌生化和血清鉴定结果

由于弗氏柠檬酸杆菌和大肠埃希氏菌的许多抗原与沙门氏菌的抗原完全或部分相同，且这2种菌与沙门氏菌属O多价A-F诊断血清会发生交叉凝集反应，因此血清鉴定阳性者必须进一步做其它生化鉴定。通常情况，做TSI和血清学鉴定后，只对血清鉴定阳性菌落进一步做后续生化鉴定。为慎重起见，本次对疑似阴性的考核样品的菌落仍然做了后续生化鉴定。

W和Q样品平板分离出的6种可疑菌落TSI和血清学鉴定结果见表４。表4表明，W样品在沙门氏菌显色平板上分离到的紫红色可疑菌落中2个菌落(菌落①和②)为血清学鉴定阴性，而在BS和XLD 2个平板上挑出的２个可疑菌落(菌落③和④)血清学鉴定阳性，且生化鉴定符合，判定为沙门氏菌检出，菌落①②③和④属于同一样品，因而①②无须生化再鉴定。Q样品在XLD平板上的可疑菌落(菌落⑤和⑥)经生化和血清鉴定，结果为非沙门氏菌。在能力考核中，检出阳性的判断比阴性样品的要容易，而对于诸多形态可疑菌落的阴性样品，需对可疑菌落逐个鉴定，否则易犯错。

3.3奶粉样品中阪崎肠杆菌的检测分析

3.3.1平板分离

阪崎肠杆菌在历史上一直被误认为是黄色阴沟肠杆菌，因此两者互为干扰菌；阪崎肠杆菌显色平板是利用其α-葡萄糖苷酶阳性，在TSA中加入XαGlc(5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷酸)，α-葡萄糖苷酶作用于XαGlc而使阪崎肠杆菌生成特异性蓝绿色菌落。样品V在阪崎肠杆菌显色平板出现可疑蓝绿色菌落(表５)，于是挑取10个可疑菌落于1 mL无菌生理盐水中，稀释混匀后在TSA划线分离培养，借助放大镜观察菌落，结果出现2种菌落，有黄色菌落和淡黄粉色菌落，再进一步做生化鉴定。样品G无阪崎肠杆菌可疑菌落，判为未检出。挑取可疑菌落是关键步骤，挑取的位置和个数尽可能增大捕捉概率，如果侥幸调取2~3个可疑菌落，则可能会漏检。

3.3.2生化鉴定

对样品V在TSA平板上生长的2种菌落⑦和⑧进行生化鉴定，如表6，结果表明，可疑菌落⑦产黄色素，氧化酶、山梨醇、赖氨酸阴性，精氨酸双水解酶、鼠李糖、蔗糖、蜜二糖、苦杏仁甙阳性，鉴定结果符合阪崎肠杆菌生化特征。菌落⑧的生化鉴定结果不符合阪崎肠杆菌生化特征。由此可见，α-葡萄糖苷酶阳性是阪崎肠杆菌的属性，但是并非唯一；阪崎肠杆菌显色培养基对阪崎肠杆菌的特异性是有限的，这与吴清平等的论述一致。当在显色平板上发现有可疑菌落，若鉴定为阴性时，需用全排除法，否则容易出现假阴性。

3.4奶粉样品中沙门氏菌和阪崎肠杆菌检测结果

W样品检出沙门氏菌，Q样品未检出沙门氏菌；V样品检出阪崎肠杆菌，G样品未检出阪崎肠杆菌，检测结果满意。

4结论和讨论

在分离鉴别沙门氏菌时，BS平板具有重要的决定性作用，而其它2种平板上容易受干扰菌的影响，只能起辅助鉴别作用。这一结论与与杨云斌等的“沙门显色培养基的分离鉴定效果最好”的结论不同，但与国家标准GB4789.4-2016的技术规范主旨一致。

辛酯酶是沙门氏菌显色培养选择设计的主要依据，其对沙门氏菌的灵敏度和特异度分别为100%和84.09%。本次实验中，W样品在显色平板上明显都是沙门氏菌可疑菌落，挑选2个菌落实验但是血清鉴定结果却是阴性，原因是显示辛酯酶阳性菌除了多数沙门氏菌外，还有铜绿假单胞菌、粘质沙雷氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、荧光假单孢菌和恶臭假单孢菌等。

此外，在此次实验中本实验室还积累了两点经验：第一，在准备过程中，有意设计了两种标准菌交互培养和分离的实验，主要目的为积累知识，增强辨别能力。第二，能力验证样品不同于普通食品样，应试过程对于典型菌，一般操作者不容易犯错，确证相对容易；但对于非典型菌，则需要耐心做出后续鉴定，而不能轻易下结论；对于初筛是疑似阳性者后续鉴定为阴性时，则需增多可疑菌的鉴定，必要时用全排除法。

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